沙门氏菌荧光定量pcr检测试剂盒
使用手册v1.0
salmonella qpcr kit
cat#:14-32800
低温运输，-20℃保存
产品及特点沙门氏菌（salmonella）引起的中毒病例在世界各地的食物中毒病例中所
占数量比例非常高。在我国，70-80%细菌性食物中毒事件是由沙门氏菌引起的， 沙
门氏菌的检测已成为食品质量安全监控的必检卫生指标。本试剂盒就是针对沙门氏
菌肠毒素stn 基因设计特异性引物，利用实时荧光定量pcr 技术开发的沙门氏菌
检测试剂盒，它通过荧光染料实时显示样品模板dna 的量，并通过坐标曲线表示
出来，结果直观准确。它具有下列特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2. 荧光定量pcr 检测，反应特异性强。
3. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
规格及成分成分编号50 次塑料袋包装
2×qpcr mix 90408 1.0 ml
stn 专一性引物对yw13891390 100 μl
stn 阳性对照
（1.5×10e9 拷贝/μl）
yw13911392 10 μl
超纯水100935 1 ml
使用手册1 份
运输及保存低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂样品等
使用方法一、样品dna 的制备
用自选方法提取细菌样品dna。注意：dna 纯化方法是决定检测灵敏度的
关键因素。如果不能很好纯化样品dna，后面的pcr 再灵敏也不能提高整体检
测灵敏度。
二、制备stn 标准曲线（以10-10e6 这6 个10 倍稀释度为例。由于标准品浓
度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试
剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活
体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的dna 片段作为阳性
对照。
1. 标记6 个离心管，分别为6，5，4，3，2和1 号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μl 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用te 缓冲液或超纯水10 倍梯度稀释到
10e7 拷贝/μl（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10e7
拷贝/μl，建议每次稀释10 倍，梯度稀释至10e7 拷贝/μl）。
4. 在6 号管中加入5 μl 10e7 拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震
荡1 分钟，得10e6 拷贝/μl 的阳性对照。
5. 换枪头，从6 号管中取5 μl 溶液到5 号管中，充分震荡1 分钟，得10e5
拷贝/μl 的阳性对照。
6. 换枪头，从5 号管中取5 μl 溶液到4 号管中，重复上面的操作直到得到6
个稀释度的阳性对照。
7. nc 管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6 号管中分别取5 μl 和待测样品一起进行定量pcr（见下步），每个
样品做3 次重复。pcr 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光pcr ct 值，
并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
三、pcr 检测（20 μl 体系）
1. 在pcr 管中加入下列成分（待测样品需要做三次重复，下表只列出一次）：
注:仅abi7500、7700 和7900 仪器需要使用rox 作为对照，其他荧光pcr
仪器（如icycler iq、mj option、mj chromo4、mx3000、mx4000、
rotorgene 3000、rotorgene 6000 和lightcycler480）不需要使用rox。
2. 建议pcr 反应参数（具体pcr 参数可以根据仪器不同而自行优化）
过程温度时间
预变性93℃ 5 min
pcr 反应
（40 个循环）
93℃ 35 s
55℃ 45 s
成分样品阴性对照阳性对照
2×qpcr mix 10 μl 10 μl 10 μl
待测样品dna 模板1-5 μl 无无
stn 阳性对照无无
5 ul（每个管加一个稀释度的对照）
自备10×rox (见注) 2 μl 2 μl 2 μl
stn 专一性引物对2 μl 2 μl 2 μl
补水到20 μl
3. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合
dna 时，最大吸收光谱在471 nm，结合dna 时的最大吸收光谱在500 nm，
最大发射光谱在530 nm。
四、数据处理
以stn 阳性对照浓度的log 值为横轴，以ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再
以待测样品浓度的log 为横轴，以ct 值为纵轴，通过待测样品的ct 值计算出
样品dna 的浓度。
关联产品鹦鹉热衣原体荧光定量pcr 检测试剂盒（cat#:11-3780）
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