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Thermostable dUTPase

2021-8-10 12:26:43发布17次查看

概述: 
thermostabledutpase能够催化水解dutp,生成脱氧尿苷单磷酸(dump)和无机焦磷酸。dutpase最大化的提高了高保真聚合酶pcr的效率,消除了pcr反应以及dntp溶液中存在的dutp。通常情况下,溶液中的dctp会自发脱氨生成dutp,dutp积累到一定浓度会对pcr反应造成严重的负面影响。pcr反应中dutp的掺入会导致突变和聚合反应的中止(高保真聚合酶)或速度降低(taq聚合酶),影响pcr产物的产量和扩增长度。dutpase可以降解溶液中的dutp使其浓度维持在一个较低的水平,从而保证了pcr反应的顺利进行。dutpase能提高pcr的产量和保真度,有利于后续的下游应用。尤其是对于pcr保真度及产物量敏感的应用,如重组蛋白构建和基因的表达分析(半定量rt-pcr技术和实时定量pcr分析),其中产物积累的细微差距在基因表达分析上有显著的影响。 
来源: 
e. coli菌株。 
应用: 
1. pcr反应增强剂:增加pcr反应的产量,提高pcr反应扩增长度。
50 μl的pfu反应体系中加入1-3 u dutpase(<3.0 kb)或4-6 u dutpase(>3.0kb)。最高可扩增长度为15-19 kb的基因组dna。 
质量检测: 
核酸外切酶活性:50 µl反应体系中,20 u本酶与1 µg的hindiii消化的λdna于37°c温育4小时,电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性:50 µl反应体系中,20 u本酶与1 µg的puc19质粒于37°c温育4小时,电泳条带无明显变化。
纯度:经sds-page (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。 
质保声明: 
thermostable dutpase经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。 
单位定义: 
1单位是指80°c条件下反应1小时,能催化10 nmol的dutp水解为dump。 
参考文献: 
1. hogrefe,h.h. etal. (2002), proc.natl.acad.sci.usa., 99(2),596-601.3472-3481.

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