耐碱蛋白a琼脂糖凝胶ff
品  名
耐碱蛋白a琼脂糖凝胶ff
英文名
alkali-tolerant protein a nupharose fast flow , rat-panupharose ff
目录号
nrpb06s(预装柱)
规  格
1 ml预装柱，5ml预装柱，10 ml预装柱，特殊规格订制
运  输
2 ~25℃，常压、避光
贮  存
20%乙醇，2 ~8℃
保质期
3年
相关介绍：
耐碱蛋白a琼脂糖凝胶ff与普通的蛋白a琼脂糖凝胶相比，主要提高了凝胶的耐碱性，可以用0.1 ~ 0.5 mnaoh溶液清洗和去除热源。在骨架与重组耐碱蛋白a键合上分别设计了延伸碳臂和定向结合位点，保证了重组耐碱蛋白a与骨架的定向牢固键合，以及与抗体的高效亲和。
技术指标：
基质
4%高度交联琼脂糖凝胶
配基
重组耐碱蛋白a
配基密度
≥6 mg/ml
填料粒径
60 ~180 μm
最大流速
800 cm/h
推荐流速
20 ~100 cm/h
工作（清洗）ph值
3 ~11(2 ~13)
耐反压
0.3 mpa
载量
≥40 mg/ml igg
产品特点：
1) 配基脱落：约1~7 ng rat-pa/mgigg，配套的rat-pa试剂盒（nrpb53s）检测多次使用的洗脱液中残留rat-pa含量
2) 耐碱性
在25℃的条件下，将rat-pa浸在不同浓度的naoh溶液中：
0.1 m 处理72 h载量维持在90%以上；
0.5 m处理16 h在80%以上，处理36 h在50%以上；
1.0 m处理4 h在90%以上，处理8 h在50%以上。
3) 耐酸性
在25℃的条件下，将rat-pa浸在不同ph的酸溶液中：
ph 3.0、ph 2.0、0.1 m hcl (ph 1.0)处理6天载量均维持在90%以上
0.5 mhcl处理2天载量在80%以上，处理6天在50%以上
4) 耐压性
仪器：akta explorer 100
柱子：1.0 cm×30 cm
流速：每30 s增加0.5 ml/min
5) 使用寿命
200次循环纯化牛血清中igg，每次使用0.1 mnaoh处理15 min，200次使用后未发现明显的载量损失。
应用举例：
结合缓冲液：20 mm磷酸缓冲液，150 mm nacl，ph 7.4
洗脱缓冲液：0.1 m柠檬酸缓冲液，ph 4.0
中和缓冲液：1 m tris-hcl，ph 9.0
1) 1ml耐碱蛋白a琼脂糖凝胶ff预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液；
2) 用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积；
3) 将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml，0.45μm滤膜过滤上样；
4) 用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积；
5) 用洗脱缓冲液洗脱抗体，收集洗脱峰，并用中和缓冲液调节其ph至中性；
6) 每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 m naoh溶液再生清洗；
7) sds-page（图1）电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
注意事项：
1) 预填柱使用简易方便，在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2) 样品洗脱后一般ph很低，应立即用碱性中和缓冲液（如1 m tris-hcl，ph9.0） 将收集到的抗体溶液中和到中性，或在收集容器中事先装5% ~ 20%、ph 7 ~ 9的缓冲液（如1 m tris-hcl或1 m磷酸缓冲液），以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
3) 使用时保证柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，如果已经产生气泡，可以自行重装柱子。
4) 使用后应进行在位清洗，一般建议用0.1 m naoh清洗1 ~3个柱体积（10 ~ 30 min），立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
5) 更高要求（消毒、去内毒素、超牢固蛋白残留等）的在位清洗，可以先用含还原剂（如100 mmdtt、β-me或1-巯基甘油）的平衡缓冲液清洗3 ~ 5个柱体积，再用0.1 ~ 0.5 mnaoh洗1 ~ 5个柱体积（10 ~ 30 min），然后用无菌无内毒素的平衡缓冲液清洗5个柱体积以上。
6) 虽然本产品具有较好的碱耐受性，但长期使用较高的naoh浓度（如0.5 mol/l）清洗仍会缩短使用寿命，建议每1 ~ 3次用0.1 mnaoh清洗1次，每5 ~ 20次用0.5 m naoh清洗1次。
7) 为了更好的保护填料，应避免强烈的ph变化，建议酸性洗脱目的抗体后，用平衡缓冲液恢复至中性，再进行naoh清洗。
8) 本产品具有极低的配基脱落率（＜10 ng/mgigg），结合耐碱特性，特别适用于单克隆抗体的生产。但实验发现长期储存后首次使用配基脱落率会比较高，建议长期储存后的首次使用，先用酸性洗脱液清洗3 ~ 5个柱体积，再用平衡缓冲液平衡和样品纯化。
推荐流速
预装柱体积
1 ml
5 ml
10 ml
流速(ml /min)
0.1
0.5
1

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