大鼠 sod 免疫组化试剂盒
该试剂盒以 hrp 标记的链霉亲和素复合物（hrp streptavidin conjugate，
hrp-sa）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性 sod 抗原。该试剂盒具有灵
敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的 sod 一抗与相应靶抗原
结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入 hrp-sa，形成抗原—特异
一抗—生物素化二抗—hrp-sa复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂a通透液：0.1%triton-x100 10ml（选用）
试剂b封闭缓冲液（封闭用）20ml
试剂c（原装进口分装）已稀释的即用型sod一抗（2.5ml）
试剂d（原装进口分装）生物素化羊抗兔igg1支
（浓度1.5mg/ml，稀释比为1:300~1:500）50μl+抗体稀释液20ml
试剂ehrp-sa复合物1支（浓度1μm，稀释比1:50~1:200）100μl
试剂fdab显色液5ml
用户自备试剂：
1．10mmtbs（ph7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800ml，浓盐酸调ph值至7.2~7.4，最后定容至1000ml
tbs-t：tbs+tween20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mmph6.0柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900ml，浓盐酸调ph值至6.0，最后定容至1000ml
或：0.5medta修复液（ph8.0）
edta·2h2o186.1g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700ml，用10mmnaoh调ph值至8.0，最后定容至1000ml
3.缓冲甘油封固剂10ml
4.tween205ml
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案） ：
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案） ：
石蜡包埋组织切片3~4μm厚度
1.烤片：将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次（即二甲苯ⅰ、ⅱ、ⅲ） ，每次
10min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min） ，85%
乙醇2min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddh2o洗2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddh2o 洗 2×
2min，tbs 洗涤（2×2min） （具体修复方法见附 1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第5步封闭。
5.封闭：滴加试剂b，37℃湿盒孵育30min；
6.加一抗：滴加用试剂c（即用型一抗），37℃湿盒孵育2hr或4℃过夜；
7.洗涤：tbs-t洗涤（3×5min）；
8.封闭：滴加试剂b，37℃湿盒孵育10min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂 d） ，37℃湿盒中孵育
30min；
10.洗涤：tbs-t洗涤（3×5min）；
11.封闭：滴加试剂tween20，37℃湿盒孵育封闭20min；
12.加hrp-sa： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂 e（1：50~200，终浓度 5~20 nm） ，
37℃湿盒中孵育30min；
13.洗涤：tbs-t洗涤（3×5min），tbs洗涤（2×5min）；
14.显色：应用dab溶液（试剂f）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片：待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像：显微镜下观察成像。
注意事项：
1.修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2.缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3.若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4.封片前一定要换用tbs充分洗涤，以便洗去组织上残留的tween 20，否则会
影响结果观察。
5.如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附 1：
抗原修复方法
附 1：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01m ph6.0） 、edta 抗原修复液（ph8.0 或
9.0）等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理，tbs 冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育
20~30min后tbs冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾， 将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或高档继续微波 10~15min，取出微波
盒冷却至室温后， 自来水冲洗， 取出切片。 因不同微波炉微波处理时间存在差异，
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复
液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时 1.5~2.5min 即可脱离热源，自
然冷却至室温后自来水冲洗， 取出切片。 此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾， 微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。
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