一般公司多糖多酚植物rna提取试剂盒失败原因和解决方案 很多植物rna的样品由于含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，造成rna提取过程中氧化、褐化、降解、由于植物品种的多样性造成情况更加复杂。手工的ctab类的方法提取因为时间太长，太繁琐，手工方法不在讨论之列。一直以来没有一款好的试剂盒包括qiagen、promega等进口试剂盒也无法满足科研工作者对植物rna提取的要求。下面我们来分析一下植物rna为什么不能提取成功的原因： 市面上最常见的rna提取试剂盒无非是两种：第一种：trizol改良类方法（包括溶液型的和离心柱型的）、第二种：直接裂解过柱子的方法（离心柱）第一种试剂盒失败的原因1：rna市面上面最流行的方法就是trizol，或者trizol改良，或者trizol加离心柱一类的改良方法。trizol也就是异硫氰酸胍/苯酚/氯仿原理一步法的方法最适合的对象是动物源性的组织细胞，针对普通多糖多酚低的植物性的材料，trizol类原理产品也可以提取。但是多糖、多酚、次级代谢产物丰富的情况下，trizol类方法无法防止多糖多酚对于rna/dna分相的干扰，要么残留大量dna，要么残留大量多糖、多酚或者次级代谢产物，氧化破坏rna，或者残留这些多糖多酚，色素代谢产物等抑制下游的反转录等反应。限于技术水平的限制，市面上绝大多数的国产厂家是使用trizol的方法进行改良，无论是不是加了离心柱。但是实践证明，改良不能从根本上解决问题。判断是否试剂盒使用这种改良的方法非常简单：是否裂解液含有苯酚的味道和使用氯仿，如果使用到了氯仿就是trizol方法的改良。第二种试剂盒失败的原因：直接裂解过柱子的方法是目前最先进的方法，但是也是技术含量最高的方法。这个方法采用裂解液（不含苯酚，氯仿）直接裂解，rna/dna同时过柱子，然后在柱子上面直接分离rna/dna，所以，这种方法的优点第一在于，避免了使用trizol在多糖多酚下不能成功分离rna/dna的弊端、第二在于，不使用有毒的苯酚氯仿。但是正是因为其技术先进，所以难度很高，国内厂家包括进口公司有两个技术难点一直没有突破。第一，裂解液的成分必须针对去除多糖多酚进行研发添加去多糖多酚，代谢产物成分。否则会同样碰到多糖多酚干扰提取的问题。第二、和trizol原理不同，直接过柱法dna/rna同时加到吸附柱上去。如何去除dna是第一个难点。否则会残留大量dna。详细请参见//blog.sina.com.cn/s/blog_72b6db330100xc4r.html

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