猪胃肠炎流行腹泻(tgev/pedv)实时荧光pcr试剂盒说明书
【产品名称】
通用名称：猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒(tgev/pedv)核酸检测试剂盒(实时荧光-pcr法)
name ：swine transmissible gastroenteritis / porcine epidemic diarrhea virus (tgev/pedv) nucleic acid detection kit (real-time fluorescence -pcr)?
【包装规格】48t/盒
【预期用途】
猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒(tgev/pedv)感染引起的猪急性、热性、高度接触性传染病。其特征为高热，网状内皮系统出血，死亡率高。家养猪和野猪都可以被感染，而且不分品种和年龄。
本试剂盒适用于检测分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等样本中的猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒(tgev/pedv)，用于猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒(tgev/pedv)感染的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒根据猪传染性胃肠炎/猪流行性腹泻病毒(tgev/pedv)?基因组设计特异性引物和探针，用荧光 pcr 技术对核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名 称 规 格
核酸提取液 1.5ml×2 管
酶液 50μl×1 管
反应液 1.0ml×1 管
阳性质控品 50μl×1 管
阴性质控品 250μl×1 管
注：
1）不同批号试剂不能混用。
2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融少于 7 次，有效期 12 个月。
【适用仪器】
abi 、安捷伦 mx3000p/3005p、lightcycler、bio-rad、eppendorf 等系列荧光定量 pcr 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀猪，取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
【使用方法】
1.样品处理（样本处理区）
1.1样本前处理
组织样品：每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g，手术剪剪碎混匀后取
0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5ml 生理盐水后继续研磨，待匀浆后转至 1.5ml 灭菌离心管中，8000rpm 离心 2min，取上清液 100μl 于 1.5ml 灭菌离心管中；全血样本：待血凝固后，取血清 100μl 于 1.5ml 灭菌离心管中。
1.2dna 提取
1)对上述处理好的标本加入 50μl 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000
rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5ml ep 管，-20℃保存；
2)dna 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生产的 dna 提取试剂盒
（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
2.试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 pcr 反应管管数为 n(n=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：
试剂 asfv 反应液 酶液
用量（样本数为 n） 20μl 1μl
将混合好的测试反应液分装到 pcr 反应管中，21ul/管。
3.加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 dna、阳性质控品、阴性质控品各取 4μl，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4.pcr 扩增（核酸扩增区）
4.1将待检测反应管置于荧光定量 pcr 仪反应槽内；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μl；
荧光通道选择： 检测通道（reporter dye）fam， 淬灭通道（quencher dye）
none，abi 系列仪器请勿选择 rox 参比荧光，选择 none 即可。
5.2结果判断
阳性：检测通道 ct 值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 ct 值>35.0，且出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 ct 值且无明显的扩增曲线。
【参考文献】
[1]国家质量监督检验检疫总局. sn/t 1559-2010 非洲猪瘟检疫技术规范[s].
[2]黄萍, 肖家勇, 欧阳振宇. 非洲猪瘟病毒实时荧光定量 pcr 检测方法的建立[s]. 中国动物检疫, 2010.
[3]董志珍, 侯艳梅, 赵祥平. 非洲猪瘟病毒实时荧光定量 pcr 检测方法的建立[s]. 中国兽医杂志, 2009.
公司优势：
1）质量：我司提供的的试剂为世界知名品牌
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