实验方法原理    细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质dna 在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp 长的dna 大片段, 或180~200 bp 整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（dna ladder）。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯dna，进行琼脂糖凝胶和溴化乙啶染色，在凋亡细胞群中可观察到典型的dna ladder。如果细胞量很少，还可在分离提纯dna 后，用32p-atp 和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（tdt）使dna 标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中dna ladder 的形成。
实验步骤    
一、大分子染色体dna 段的测定
细胞凋亡的早期,染色体断裂成为50~300 kbp 长的dna 大片段。所有超过一定分子量大小的双链dna 分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度相同。线性dna 的双螺旋半径超过凝胶半径时，即达到分辨力的极限。此时凝胶不再按分子量的大小来筛分dna，dna 像通过弯管一样，以其一端指向电场一极而通过凝胶，这种迁移模式称之为爬行。因此，细胞凋亡早期产生的50~300 kbp 长的dna 大片段不能用普通的琼脂糖凝胶电泳来分离。通常采用脉冲电泳技术可圆满地解决这一问题。这个方法是在凝胶上外加正交的交变脉冲电场。每当电场方向改变后，大的dna分子便滞流在爬行管中，直至新的电场轴向重新定向后，才能继续向前移动。dna分子量越大，这种重排所需要的时间就越长。当dna 分子变换方向的时间小于电脉冲周期时，dna 就可以按其分子量大小分开。
二、dna ladder 测定
细胞凋亡或称程序性细胞死亡（programmed cell death ,pcd）是细胞的生命现象之一，它在机体的胚胎发育、组织修复及自身反应性t淋巴细胞的清除等方面起着十分重要的作用。（来源：免疫学实习指导——北京大学医学部基础医学院免疫学系） 
收获细胞（1x107）沉淀?细胞裂解液13000 rpm′5 min, 收集上清1%sds和rnasea（5 mg/ml）56 °c，2 h。蛋白酶k（2.5 mg/ml）37 °c，2 h，1/10 体积3 m醋酸钠和2.5倍体积的冷无水乙醇沉淀dna，4 °c过夜。14000 rpm′15 min最后将沉淀溶解在te buffer中，加dna loading buffer 1.2 %琼脂糖凝胶电泳，eb染色并照相。
三、凋亡细胞dna 含量的流式细胞计分析
收集细胞，70 %冷乙醇（in pbs）4 °c 固定过夜，pbs 洗涤，1000 rpm′10 minrnase a（0.5 mg/ml）37 °c 消化30 min pi（50 mg/ml）染色，室温避光15 min，facscan 分析dna 亚二倍体的形成及细胞周期的变化。
四、apoalerttm lm-pcr ladder assay (clontech)
敏感度高，适合于检测少量样本，小部分凋亡细胞。如临床活组织检测。