hepengbio 革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
hepengbio 革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂是一种旨在使用差速离心，分离并收集所有细胞外膜囊泡
的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种革兰氏阴性细菌外膜囊泡
及其蛋白的纯化。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取产量和纯度皆佳。 技术背景
外膜囊泡（outer membrane vesicle；omv）为含有周质内容物（包括外膜蛋白、dna、rna、脂多糖、脂
质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等）的球形电子致密芽状体（spherical bud），细胞外间隔体，双
层磷脂，20 至 200 纳米大小，来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物，使之与环境
或宿主细胞进行反应，并调解各种功能，包括促进病理形成，调节细菌互动，转运各种信号分子（例如 dna、
rna、蛋白质、内毒素、毒力因子等），保护细菌生存、结合和侵入，引起毒性，产生抗生素抗性等。外膜
囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡 10 倍于非病原菌
体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。通过差速离心和蛋白酶抑制混合剂，获得高纯外膜囊泡，充
分保留其蛋白质的免疫和生物学活性。 产品内容
hepengbio 保存液（reagent a） 毫升
hepengbio 溶解液（reagent b） 毫升
hepengbio 活性液（reagent c） 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存 hepengbio 活性液（reagent c）在-20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月
用户自备
50 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器
分光光度仪：用于测定细菌浓度
台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于样品操作
恒温摇床：用于培养细菌细胞
0.45 微米滤膜：用于样品操作
真空浓缩装置：用于样品操作
2
实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的 hepengbio 活性液（reagent c）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，
然后移出 xx 毫升 hepengbio 溶解液（reagent b）到 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升 hepengbio 活性
液（reagent c），充分混匀，置于冰槽里，标记为 hepengbio 溶解工作液。然后进行下列操作。
1． 准备好 1 毫升过夜培养的新鲜细菌样品
2． 移取 500 微升到 50 毫升细菌培养液（注意：用户可以进行诱导培养，例如无铁培养等）
3． 放进 37℃恒温摇床孵育过夜，速度为 200rpm
4． 在分光光度仪上测 od600 为 1（1 od＝1 x 10
9细胞/毫升；总量为 5 x 10
10细胞）
5． 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
6． 放进 4℃台式离心机离心 30 分钟，速度为 5000g
7． 小心移取上清液到新的 50 毫升锥形离心管
8． 重复实验步骤 6 和 7 一次
9． 使用 0.45 微米滤膜真空过滤一次
10．（选择步骤）使用 100kd 蛋白临界点浓缩处理
11．放进 4℃超速离心机离心 3 小时，速度为 150000g
12．小心抽去上清液
13．加入 xx 微升预冷的 hepengbio 保存液（reagent a）
14．或加入 xx 微升预冷的含有 hepengbio 溶解液（reagent b）和 hepengbio 活性液（reagent c）
的 hepengbio 溶解工作液
15．用枪头上下抽吸，充分混匀
16．转移到到新的预冷的 1.5 毫升离心管
17．即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰冰槽里备用
18．进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等
注意事项
1． 本产品为 20 次（50 毫升菌液）操作
2． 所有操作须在 4℃状态下进行
3． 建议使用新鲜细菌接种，培养到指数生长阶段为理想状态
4． hepengbio 活性液（reagent c）避免反复冻融
5． 本产品按照 50 毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量，可相应调整试剂用量
6． 根据菌种不同，50 毫升（od600＝1）菌液可获得 5 至 100 微克外膜囊泡蛋白
7． 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，严格避免反复冻融
8． 本公司提供系列细菌试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定无蛋白酶污染
(来源：赫澎（上海）生物科技有限公司)

---