研域教您如何选择二级试剂
 常见实验中，各实验标本测试免疫化学技术能否成功检验，取决于我们购买试剂时所选的试剂是否为特异性好的二级试剂，二级试剂用于鉴定免疫染色和免疫印迹中未标记的*抗体的位置。以下根据我司研究人员总结实验方法，选择zui佳二级试剂时主要应考虑4个方面的因素：①与抗体相互作用的特异性； ②商业来源试剂的滴度；③检测试剂的灵敏度；④二级试剂所产生的背景。
一、特异性
 影响选择二级试剂的zui后一个因素是其识别*抗体的特异性。如果需要在含有其他竞争性的蛋白中识别*抗体时，测定交叉反应极为重要。zui常见的情况是免疫染色样本中含有来自宿主器官的抗体，或是双抗体标记的荧光试验
二、商业来源试剂的滴度
 分析不同厂商的产品需考虑的一个重要因素是使用该试剂的有效滴度，例如1mg标记抗体的成本在不同的厂家差异很大。某些商业化抗体，虽然其单位重量成本较高，但一般可作10倍稀释后使用，故此类试剂更具有应用价值。
 此外，使用较高稀释倍数的二级试剂可产生更清晰的背景。因此，应选择能在较低滴度使用的二级试剂。所有的稀释一定要使用含蛋白的缓冲液，例如含3％bsa的pbs，低浓度蛋白有变性的倾向，增加了非特异性相互作用的可能性，抵消了高倍稀释的优势。
三、商业来源试剂的灵敏度
 二级试剂的灵敏度取决于两方面的因素，即选择适当的标记物及熟悉的偶联技术。应通过比较不同的商业货源测试第二试剂标记的偶联效果。
  
 从不同的公司购买数批有效的二级试剂，并在相同的实验室条件下做对比试验，此类试验应该稳定可靠，容易重复。尽量从不同的公司选择合适的供应批次，通过鉴定证实一批好试剂后，应根据需要购买，并留少量样品作为下次试验的标准。一旦选定较好的批号，应与厂商保持。
四、二级试剂产生的背景
 在任何试验中由二级试剂引起的背景问题可以设立不加*抗体的对照评估。zui佳的二级试剂在无*抗体存在时应不产生可检测的信号。实际上，很少能获得这种理想的结果，但一个良好的二级试剂本身所产生的背景应当相当低。
 长期存放的二级试剂常发生凝聚或变性，所以连续监测背景就显得特别重要，这不仅在评价有效的商用二级试剂时极为重要，在实验中也应作为常规要求。这对细胞和组织免疫染色特别适合，因此在每一次试验中，应将不加*抗体作为对照。
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