货号：yc1131                                          规格：100管/96样
糖原含量试剂盒说明书
微量法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。肝糖原可调节血糖浓度，当血糖升高时可在肝脏合成糖原，血糖降低时，肝糖原则分解为葡萄糖以补充血糖。因此，肝糖原对维持血糖的相对平衡十分重要。肌糖原是肌肉中糖的储存形式,在剧烈运动消耗大量血糖时，肌糖原不能直接分解成血糖，必须先分解产生乳酸,随血液循环到肝脏,通过糖异生转变为肝糖原或葡萄糖。
测定原理：
蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体 100ml×1 瓶，4℃保存；
试剂一：0.1mg/ml 的葡萄糖标准液 10ml×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；
糖原提取：
1﹑细胞或细菌：收集500~1000万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入0.75ml提取液超声波破碎细菌或细胞（功率20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次）；转移至10ml试管中，95℃水浴20min（盖紧，防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5ml，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。
2﹑组织：称取0.1~0.2g样品，加入0.75ml 提取液充分匀浆；转移至10ml试管中；95℃水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔5min振摇试管1次，使充分混匀；待组织全部溶解后，取出试管冷却后，用蒸馏水定容到5ml，混匀，8000g 25℃离心10min，取上清液待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95℃。
3、试剂二工作液的配制：在试剂二中倒入6ml蒸馏水，缓慢倒入24ml浓硫酸，充分溶解混匀后使用；用不完的试剂4℃保存一周；
4、加样表（在 ep 管中反应） ：
试剂（μl）
空白管  
标准管  
测定管
待测样本  
 
 
60
试剂一
 
60
 
蒸馏水  
60
 
 
试剂二  
240  
240  
240
混匀，置95℃水浴10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取200μl转移至微量石英比色皿或 96孔板中，于620nm波长处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为 a1、a2 和 a3。
注意：1、空白管和标准管只要测一次。
2、如果 a3-a1大于2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
糖原含量的计算：
1、按照样本质量计算
糖原（mg/g 鲜重）＝1.11×(c 标准×v1)×(a3-a1)÷(a2-a1)÷(w×v1÷v2)
= 0.555×(a3-a1)÷（a2-a1)÷w
2、按照蛋白质含量计算
糖原(mg/mg prot)＝1.11×(c 标准×v1)×(a3-a1) ÷(a2-a1) ÷(v1×cpr)
=0.111×(a3-a1) ÷（a2-a1) ÷cpr
1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于
100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色；c 标准管：标准管浓度，0.1mg/ml；v1：加入反应体系中待测样本体积，0.06ml；v2：加入提取液体积，5ml； cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；w：样本鲜重，g。
注意：最低检测限为 10ng/g  鲜重或 0.1ng/ mg prot 。
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