产品及特点
牛细小病毒(bovine parvovirus,bpv) 会引发牛细小病毒感染，是一种接触性传染病,以下痢为主要症状,其特征是母牛生殖机能障碍，导致妊娠母牛感染导致流产、死胎，犊牛感染则表现肠炎、腹泻。牛细小病毒感染在牛群中发生比较广泛，目前国内外对其研究的较少,发生此病的国家也不多，本产品就是以染料法荧光定量pcr技术为基础开发的专门检测牛细小病毒的试剂盒，它具有下列特点：
即开即用，用户只需要提供样品dna模板。引物和探针经过优化，灵敏性高。提供阳性对照，便于区分假阴性样品。特异性高，引物是根据牛细小病毒高度保守区设计，不会跟其他病毒的dna发生交叉反应。本产品足够50次20μl体系的探针法荧光定量pcr反应。本产品只能用于科研。  
规格及成分
成分
编号
十孔盒包装
2×probe qpcr magicmix
190303
0.5 ml（本色盖）
荧光pcr专用模板稀释液
180701
1 ml（黄盖）
牛细小病毒 pcr引物
15-44000yw
100 μl（白盖）
牛细小病毒 qpcr探针
15-44000pro
100 μl（棕色管）
牛细小病毒阳性对照2.0
(1×10e8拷贝/μl)
15-44000pc
50 μl（红盖）
天净沙核酸释释剂试用装
61202
50次（2.5ml）
使用手册
15-44000sc
1份
 
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
 
自备试剂
样品dna。
 
使用方法
一、稀释标准曲线样品（以10e2-10e7拷贝/μl这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的dna片段作为阳性对照。
标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45 μl荧光pcr专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。在7号管中加入5 μl 1×10e8拷贝/μl 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10e7拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。换枪头，在6号管中加入5 μl 1×10e7拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e6拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。换枪头，在5号管中加入5 μl 1×10e6拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e5拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品dna的制备
如果有n个样品，设置n+2个提取，多出的一个是pc（样品制备阳性对照），一个是nc（样品制备阴性对照）。可以用10μl阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为pc。另外用水作为nc。用自选方法纯化样品的dna，本试剂盒跟市场上大多数病毒dna提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒dnaout。本试剂盒免费赠送50次免dna提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为pcr模板，省略了dna提取步骤。三、probe qpcr反应（20μl体系，在样品制备室进行）
如果只做1次重复，则标记n+9个pcr管，其中n+2个用于上步得到的n+2个样品，1个用于pcr阴性对照，6个用于标准曲线样品。在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：成分
样品管
n+2个
pcr阴性对照管
标准曲线
样品管（2-7管）
2×probe qpcr magicmix
10 μl
10 μl
各10 μl
牛细小病毒 qpcr探针
2 μl
2 μl
各2 μl
牛细小病毒 pcr引物混合液
2 μl
2 μl
各2 μl
待测样品dna模板
6 μl
不加
不加
第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号）
不加
不加
各6μl（2号样到2号管，3号样到3号管…）
盖上盖子后上机，按下面参数进行pcr：过程
温度
时间
预变性
94℃
5 min
pcr反应
（40个循环）
94℃
0.5 min
55℃
0.5 min（采集fam通道的荧光信号）
72℃
0.5 min
最后延伸
72℃
min
如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的ct值从标准曲线上推算出样品dna浓度的log值，再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。  
成分
编号
十孔盒包装
2×probe qpcr magicmix
190303
0.5 ml（本色盖）
荧光pcr专用模板稀释液
180701
1 ml（黄盖）
牛细小病毒 pcr引物
15-44000yw
100 μl（白盖）
牛细小病毒 qpcr探针
15-44000pro
100 μl（棕色管）
牛细小病毒阳性对照2.0
(1×10e8拷贝/μl)
15-44000pc
50 μl（红盖）
天净沙核酸释释剂试用装
61202
50次（2.5ml）
使用手册
15-44000sc
1份
 
低温运输，-20℃保存，保存期限为12个月。
 
样品dna。
 
一、稀释标准曲线样品（以10e2-10e7拷贝/μl这6个10倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的dna片段作为阳性对照。
标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。用带芯枪头分别加入45 μl荧光pcr专用模板稀释液，用带芯枪头，下同）。在7号管中加入5 μl 1×10e8拷贝/μl 的阳性对照(试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×10e7拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。换枪头，在6号管中加入5 μl 1×10e7拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e6拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。换枪头，在5号管中加入5 μl 1×10e6拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e5拷贝/μl的标准曲线样品。放冰上待用。重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。二、样品dna的制备
如果有n个样品，设置n+2个提取，多出的一个是pc（样品制备阳性对照），一个是nc（样品制备阴性对照）。可以用10μl阳性对照的10000倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为pc。另外用水作为nc。用自选方法纯化样品的dna，本试剂盒跟市场上大多数病毒dna提取试剂盒兼容。也可以选购本公司的柱式病毒dnaout。本试剂盒免费赠送50次免dna提取的天净沙核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为pcr模板，省略了dna提取步骤。三、probe qpcr反应（20μl体系，在样品制备室进行）
如果只做1次重复，则标记n+9个pcr管，其中n+2个用于上步得到的n+2个样品，1个用于pcr阴性对照，6个用于标准曲线样品。在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加）：成分
样品管
n+2个
pcr阴性对照管
标准曲线
样品管（2-7管）
2×probe qpcr magicmix
10 μl
10 μl
各10 μl
牛细小病毒 qpcr探针
2 μl
2 μl
各2 μl
牛细小病毒 pcr引物混合液
2 μl
2 μl
各2 μl
待测样品dna模板
6 μl
不加
不加
第7步所得标准曲线样品稀释液（2-7号）
不加
不加
各6μl（2号样到2号管，3号样到3号管…）
盖上盖子后上机，按下面参数进行pcr：过程
温度
时间
预变性
94℃
5 min
pcr反应
（40个循环）
94℃
0.5 min
55℃
0.5 min（采集fam通道的荧光信号）
72℃
0.5 min
最后延伸
72℃
min
如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的ct值从标准曲线上推算出样品dna浓度的log值，再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35-40之间，则重复一次。重复实验的ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。  
牛细小病毒可视化lamp检测试剂盒
 

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