丙酮酸脱羧酶（pdc）活性检测试剂盒商品货号：ms1006
英文名称：micro pyruvate decarboxylase (pdc) assay kit
别名：丙酮酸脱羧酶试剂盒 pdc kit 丙酮酸脱羧酶（pdc）试剂盒 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒
检测方法：微量法
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ms1006 -100管/96样 索桥生物 100管/96样 ￥1400.00元  
测定意义：
pdc主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
测定原理：
pdc催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（adh）来进一步催化nadh还原乙醛生成乙醇和nad+；nadh在340nm有吸收峰，而nad+没有；通过测定340nm光吸收下降速率，来计算pdc活性。
货号：ms1006                                                    规格：100管/96样
丙酮酸脱羧酶（pdc）活性测定试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
pdc主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
测定原理：
pdc催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（adh）来进一步催化nadh还原乙醛生成乙醇和nad+；nadh在340nm有吸收峰，而nad+没有；通过测定340nm光吸收下降速率，来计算pdc活性。
自备实验用品及仪器：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂四：液体×1 瓶，﹣20℃保存。
混合试剂：临用前配制，小心把试剂四转移到试剂三中，充分溶解。
试剂六：液体×1 管，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μl提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，工作3s，间歇10s，工作35次），16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织处理：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml试剂一）进行冰浴匀浆，16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
pdc 测定操作：
1.分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2.试剂二置于25℃水浴中预热30min。
3.空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl蒸馏水、20μl混合试剂、140μl试剂二和20μl试剂六，迅速混匀后于340nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为a1和a2。
4.测定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl上清液、20μl混合试剂、140μl试剂二和20μl试剂六，迅速混匀后于340nm比色，记录15s和75s的吸光值，分别记为a3和a4。
注意：空白管只需测定一次。
pdc 活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmolnadh 氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/mg prot) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷(cpr×v样)÷t
=1.61×[(a3－a4)－(a1-a2)]÷cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1μmol nadh 氧化为 1 个酶活单位。
pdc(μmol/min/g) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷(w×v样÷v样总) ÷t
=1.61×[(a3－a4)－(a1-a2)]÷w
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中，每104个细胞每分钟催化1μmol nadh 氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/104cell) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷(细胞数量×v 样÷v 样总)÷t=1.61×[(a3－a4)－(a1-a2)]÷细胞数量
（4）按血清（浆）体积计算
活性单位定义：25℃中，每毫升血清（浆）每分钟催化1μmol nadh氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/ml) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷v 样÷÷t
=1.61×[(a3－a4)－(a1-a2)]
ε：nadh 摩尔消光系数，6.22×103 l/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；v 总：反应体系总体积，0.2ml=2×10-4 l，v 样：加入反应体系中上清液体积，0.02ml；v 样总：提取液体积，1 ml；cpr：蛋白浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司 bca 蛋白质含量试剂盒；w ：样品质量； t：反应时间，1 min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol nadh氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/mg prot) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷(cpr×v 样) ÷t=3.22×[(a3－a4)－(a1-a2)]÷cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：25℃中，每克组织每分钟催化 1μmol nadh 氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/g) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷(w×v 样÷v 样总) ÷t=3.22×[(a3－a4)－(a1-a2)]÷w
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：25℃中，每104个细胞每分钟催化1μmol nadh氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/104cell) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷(细胞数量×v 样÷v 样总)÷t=3.22×[(a3－a4)－(a1-a2)]÷细胞数量
（4）按血清（浆）体积计算
活性单位定义：25℃中，每毫升血清（浆）每分钟催化1μmol nadh 氧化为1个酶活单位。
pdc (μmol/min/ml) ={[(a3－a4)－(a1-a2)]÷ε÷d×v 总×106}÷v 样÷÷t
=3.22×[(a3－a4)－(a1-a2)]
ε：nadh 摩尔消光系数，6.22×103l/mol/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；v 总：反应体系总体积，0.2ml=2×10 -4 l，v 样：加入反应体系中上清液体积，0.02ml；v 样总：提取液体积，1 ml；cpr：蛋白浓度（mg/ml），需要另外测定，建议使用本公司bca蛋白质含量试剂盒；w ：样品质量； t：反应时间，1min。
注意事项：配制好的混合液3天内使用完。
辅酶ⅰ系列 　 　 　 　
qs1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样 500
ms1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 微量法 100管/48样 920
qs1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 170
ms1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 微量法 100管/48样 330
qs1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 320
ms1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 600
qs1004 nadh氧化酶（nox）测试盒   可见分光光度法 50管/48样 450
ms1004 nadh氧化酶（nox）测试盒   微量法 100管/96样 850
qs1005-50 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 3200
qs1005-25 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 25管/24样 2000
ms1005 柠檬酸合酶(cs）测试盒 微量法 100管/48样 3500
qs1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
ms1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 800
ms1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 微量法 100管/96样 1550
qs1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 420
ms1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 微量法 100管/96样 800
qs1010 nad激酶（nadk）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 600
ms1010 nad激酶（nadk）测试盒 微量法 100管/48样 1100
qs1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒    紫外分光光度法 25管/24样 1280
ms1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒    微量法 100管/96样 2500