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辅酶ⅰnad(h)含量试剂盒商品货号：qs1000
英文名称：nad(h) kit
别名：辅酶ⅰ含量测定试剂盒 nad(h) kit 辅酶ⅰnad(h)含量测定试剂盒 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒
检测方法：常量法
商品货号：商品品牌：规格基本售价选择规格
qs1000-50管/24样   50管/24样 ￥500.00元  
产品详细介绍 产品说明书 
测定意义：
辅酶ⅰnad(h)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，nad+是糖酵解（emp）和三羧酸循环（tca）的主要氢受体，生成的nadh经呼吸电子链（etc）传递把电子交给氧，在合成atp的同时，形成大量的ros，同时nadh再生为nad+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。nad(h)含量和nadh/nad+比值的高低可用于评价糖酵解和tca循环的强弱。较高的nad(h)及nadh/nad+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，nadh/nad+比值升高也可抑制糖酵解和tca循环。另外，nad+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理：
分别用酸性和碱性提取液提取样品中nad+和nadh，nadh通过pms的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（mtt）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而nad+可被乙醇脱氢酶还原为nadh，进一步采用mtt还原法检测。
货号：qs1000                                                      规格：50管/24样                                     
辅酶ⅰnad(h)含量试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
辅酶ⅰnad(h)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，nad+是糖酵解（emp）和三羧酸循环（tca）的主要氢受体，生成的nadh经呼吸电子链（etc）传递把电子交给氧，在合成atp的同时，形成大量的ros，同时nadh再生为nad+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。nad(h)含量和nadh/nad+比值的高低可用于评价糖酵解和tca循环的强弱。较高的nad(h)及nadh/nad+比值说明细胞呼吸耗氧量较高，处于过氧化状态。此外，nadh/nad+比值升高也可抑制糖酵解和tca循环。另外，nad+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。
测定原理：
分别用酸性和碱性提取液提取样品中nad+和nadh，nadh通过pms的递氢作用，还原氧化型噻唑蓝（mtt）为甲瓒，在570nm下检测吸光值；而nad+可被乙醇脱氢酶还原为nadh，进一步采用mtt还原法检测。
自备的实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、移液器、1 ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
酸性提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存；
碱性提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体15 ml×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体4 ml×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20 ℃避光保存，用时加入4ml蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃
       保存一周；  
试剂四：粉剂×1瓶，4 ℃避光保存，用时加入4ml蒸馏水，混匀，用不完的试剂4℃保
       存一周；
试剂五：液体1.8ml×1支，4 ℃保存；
试剂六：液体30ml×1瓶，4 ℃保存；
试剂七：液体50ml×1瓶，4 ℃保存。
nad+和nadh的提取：
1 血清（浆）中nad+和nadh的提取
nad+的提取：按照血清（浆）体积（ml）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1ml血清（浆），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
nadh的提取：按照血清（浆）体积（ml）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1ml血清（浆），加入1ml碱性提取液），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2组织中nad+和nadh的提取：
nad+的提取：按照组织质量（g）：酸性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g组织，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
nadh的提取：按照组织质量（g）：碱性提取液体积（ml）为1：5~10的比例（建议取约0.1g组织，加入1ml碱性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3 细胞或细菌中nad+和nadh的提取：
nad+的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：酸性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml酸性提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl碱性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
nadh的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：碱性提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml碱性提取液），超声波破碎（冰浴，功率20％或200w，超声3s，间隔10s，重复30次），95℃水浴5min（盖紧，以防止水分散失）；冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和，混匀，10000g 4 ℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
分光光度计预热30min以上，调节波长至570nm，蒸馏水调零。加样表(在1.5ml棕色ep管中按下表依次加样）：试剂名称(μl)
对照管
测定管
样本
50
50
试剂一
250
250
试剂二
75
75
试剂三
75
75
试剂四
75
75
试剂五
35
35
试剂六
500
混匀，室温避光静置20min
试剂六
 
500
充分混匀，静置5min后，20000g，25℃离心5min，弃上清，沉淀中加入：
试剂七
1000
1000
混匀，570nm下比色，读取对照吸光值a1和测定管吸光值a2，计算△a=a2-a1。
注意事项：
1、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三和四按比例配成混合液。
2、对照管和测定管的测定步骤的区别：对照管加完试剂一、二、三、四和五后必须马上加试剂六；测定管加完试剂一、二、三、四和五后必须反应20min后再加试剂六。
3、反应过程中注意避光。
4、由于每一个测定管需要设一个对照管，本试剂盒50管保证测24个nad+或nadh.。
nad+和nadh含量的计算：
（一）nad+含量的计算
1、血清（浆）中nad+含量计算
nad+含量(nmol/ml）=[ (△a -0.099）×36.1×v1) ]÷(v3×v1÷v2)= 722×(△a -0.099）
2、组织、细菌或细胞中nad+含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
nad+ (nmol/mg prot）=[ (△a -0.099）×36.1×v1)]÷(v1×cpr)= 36.1×(△a -0.099）÷cpr
(2)按样本鲜重计算
nad+ (nmol/g 鲜重）= [ (△a -0.099）×36.1×v1)]÷(w×v1÷v2)= 72.2×(△a -0.099）÷w
(3)按细菌或细胞密度计算
nad+ (nmol/104 cell）=[ (△a -0.099）×36.1×v1)]÷(500×v1÷v2)=0.1444×(△a -0.099）
（二）nadh含量的计算
1、血清（浆）中nadh含量计算
nadh含量(nmol/ml）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(v3×v1÷v2)= 494×(△a -0.065）
2、组织、细菌或细胞中nadh含量计算
(1)按样本蛋白浓度计算
nadh (nmol/mg prot）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(v1×cpr)= 24.7×(△a -0.065）÷cpr
(2)按样本鲜重计算
nadh (nmol/g 鲜重）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(w×v1÷v2)= 49.4×(△a -0.065）÷w
(3)按细菌或细胞密度计算
nadh (nmol/104 cell）= [ (△a -0.065）×24.7×v1) ]÷(500×v1÷v2)=0.0988×(△a -0.065）
v1：加入反应体系中样本体积，0.05ml；v2：加入提取液体积，2ml；v3：加入血清（浆）体积：0.1ml；cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml； w：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
注意：最低检测限为1nmol/ml或1nmol/g鲜重 或0.01nmol/mg prot
辅酶ⅰ系列 　 　 　 　
qs1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 可见分光光度法 50管/24样 500
ms1000 辅酶ⅰnad(h)含量测试盒 微量法 100管/48样 920
qs1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 可见分光光度法 50管/24样 170
ms1001 乳酸脱氢酶（ldh）测试盒 微量法 100管/48样 330
qs1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1002 nad-苹果酸脱氢酶（nad-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 320
ms1003 nadp-苹果酸脱氢酶（nadp-mdh）测试盒 微量法 100管/96样 600
qs1004 nadh氧化酶（nox）测试盒   可见分光光度法 50管/48样 450
ms1004 nadh氧化酶（nox）测试盒   微量法 100管/96样 850
qs1005-50 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 3200
qs1005-25 柠檬酸合酶(cs）测试盒 可见分光光度法 25管/24样 2000
ms1005 柠檬酸合酶(cs）测试盒 微量法 100管/48样 3500
qs1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 720
ms1006 丙酮酸脱羧酶（pdc）测试盒 微量法 100管/96样 1400
qs1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 280
ms1007 醇脱氢酶（adh）测试盒 微量法 100管/96样 550
qs1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 800
ms1008 单脱氢抗坏血酸还原酶（mdhar）测试盒 微量法 100管/96样 1550
qs1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 紫外分光光度法 50管/48样 420
ms1009 乙醛脱氢酶（aldh）测试盒 微量法 100管/96样 800
qs1010 nad激酶（nadk）测试盒 可见分光光度法 50管/48样 600
ms1010 nad激酶（nadk）测试盒 微量法 100管/48样 1100
qs1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒    紫外分光光度法 25管/24样 1280
ms1011 线粒体呼吸链复合体ⅰ/nadh-辅酶q还原酶测试盒    微量法 100管/96样 2500