组成及试剂配制:
1、致病性大肠杆菌(epec)核酸检测试剂盒费用说明书酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 u/l，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 u/l，100 u/l，50 u/l，25 u/l，12.5 u/l，6.25 u/l，3.12 u/l，样品稀释液直接作为空白孔 0 u/l。如配制100 u/l标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 u/l的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液a：1×10ml。
5、 检测稀释液b：1×10ml。
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样本采集、存放及运输：
1、样本采集：各类型样本按照常规方法采集；
2、存放：样本在2~8℃条件下保存应不超过72h，-70℃以下可长期保存，但应避免反复冻融（zui多冻融3次）；
3、运输：采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管（含0.4ml灭菌生理盐水），用无菌棉球将试管塞紧后，密闭送检。标本可立即用于检测，也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化（取得医疗器械许可证）的rna提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用trizol法提取，方法如下：取100l样品置于1.5ml 离心管中，加入300l裂解液（trizol），再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积异丙醇，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700l 75%乙醇，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20l depc-h2o溶解rna。
2.试剂配制
取n×19l h7n9核酸荧光pcr检测混合液与n×1l rt-pcr酶（n为反应管数）,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20l置于pcr管中，然后将样品核酸提取液、depc-h2o、阳性对照品各5l分别加入pcr管中，盖好管盖，立即进行pcr扩增反应。
4. pcr扩增反应管置于定量荧光pcr仪上，推荐循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25l。
荧光通道检测选择：选用fam通道。
pgam2 elisa kit杀菌/通透性增加蛋白样2抗体磷酸甘油酸变位酶2(pgam2)elisa试剂盒
lptn/ltn/xcl1 elisa kit嗜乳脂蛋白样3抗体淋巴细胞趋化因子(lptn/ltn/xcl1)elisa试剂盒
ly6a elisa kit杀菌/通透性增加蛋白样3抗体淋巴细胞抗原6复合物基因座a(ly6a)elisa试剂盒
lfa-3/cd58 elisa kitbrd1蛋白抗体淋巴细胞功能相关抗原3(lfa-3/cd58)elisa试剂盒
lfa-2/cd2 elisa kitbrpf3蛋白抗体淋巴细胞功能相关抗原2(lfa-2/cd2)elisa试剂盒
ltb elisa kitbxdc1蛋白抗体淋巴毒素β(ltb)elisa试剂盒
lta elisa kit脑蛋白44抗体淋巴毒素α(lta)elisa试剂盒
lek elisa kit脑蛋白44样蛋白抗体亮脑啡肽(lek)elisa试剂盒
lnpep elisa kit嗜乳脂蛋白样2抗体亮氨酰-半胱氨酰氨肽酶(lnpep)elisa试剂盒
lap elisa kit嗜乳脂蛋白样8抗体亮氨酰氨基肽酶(lap)elisa试剂盒
lrrk2 elisa kit嗜乳脂蛋白样9抗体亮氨酸富含重复丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶2(lrrk2)elisa试剂盒
lap3 elisa kitbtb/poz结构域蛋白7抗体亮氨酸氨基肽酶3(lap3)elisa试剂盒
sk elisa kit脑特异性血管生成抑制蛋白1抗体链激酶(sk)elisa试剂盒
zonulin elisa kitbcl2相关转录因子抗体连蛋白(zonulin)elisa试剂盒
gs-ana elisa kit脑环核苷酸门控通道蛋白1抗体粒细胞特异性抗核抗体(gs-ana)elisa试剂盒
gcp-2/cxcl6 elisa kit癌易感基因复合蛋白4抗体粒细胞趋化蛋白-2(gcp-2/cxcl6)elisa试剂盒
gm-csf ab elisa kit纺锤体检查点蛋白抗体粒细胞巨噬细胞集落刺激因子抗体(gm-csf ab)elisa试剂盒
gm-csf elisa kit有丝分裂检验点蛋白bubr1抗体粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)elisa试剂盒
g-csf elisa kit癌相关蛋白3抗体粒细胞集落刺激因子(g-csf)elisa试剂盒
leishimaria ab elisa kit癌相关蛋白2抗体利什曼原虫抗体(leishimaria ab)elisa试剂盒
anp elisa kit癌抗雌激素耐药蛋白1利钠肽(anp)elisa试剂盒
kp elisa kit胞浆支链氨基酸酸转氨酶抗体利钾尿肽(kp)elisa试剂盒
cirbp elisa kit磷酸化癌抗雌激素耐药蛋白1抗体冷诱导rna结合蛋白(cirbp)elisa试剂盒
cg elisa kit促凋亡调节蛋白bnip3抗体冷球蛋白(cg)elisa试剂盒
orm2 elisa kit骨形态发生蛋白2受体抗体类粘蛋白2(orm2)elisa试剂盒
orm elisa kit甲状腺激素受体共激活蛋白抗体类粘蛋白(orm)elisa试剂盒
loc382344 elisa kit磷酸化促凋亡bik蛋白抗体类似60s核糖体蛋白l21(loc382344)elisa试剂盒
tnc elisa kit蛋白酪氨酸激酶bap135抗体类肌腱蛋白c(tnc)elisa试剂盒
tn elisa kit磷酸化相关死亡促进因子抗体类肌腱蛋白(tn)elisa试剂盒
反应五要素:
参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2+
引物：引物是pcr特异性反应的关键，pcr 产物的特异性取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c过多易出现非特异条带。atgc随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

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