上海淳麦生物， 感受态细胞专家
1:dh5a菌株
dh5a是一种常用于质粒克隆的菌株。e.coli dh5a在使用puc系列质粒载体转化时,可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型:f-,φ80dlaczδm15,δ(laczya-argf)u169,deor,reca1,enda1, hsdr17(rk-,mk+),phoa,supe44,λ-,thi-1,gyra96,rela1
2:bl21(de3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体t7启动子的表达载体(如pet系列)的基因。t7噬菌体rna聚合酶位于λ 噬菌体de3区,该区整合于bl21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型:f-,ompt, hsds(rbb-mb-),gal, dcm(de3)
3:bl21(de3) plyss菌株
该菌株含有质粒plyss,因此具有氯霉素抗性。plyss含有表达t7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型:f-,ompt hsds(rbb-mb-),gal, dcm(de3,plyss ,camr
4:jm109菌株
该菌株在使用puc系列质粒载体进行dna转化或用m13 phage载体进行转染时,由于载体dna产生的lacza多肽和jm09编码的laczδm15进行α-互补,从而显示β-半乳糖苷酶活性,由此很容易鉴别重组体菌株
基因型:reca1,enda1,gyra96,thi-1,hsdr17,supe44,rela1,δ(lac-proab)/f’[trad36,proab+,laciq,laczδm15]
5:top10菌株
该菌株适用于高效的dna克隆和质粒扩增,能保证高拷贝质粒的稳定遗传。基因型:f- ,mcraδ(mrr-hsd rms-mcrbc),φ80 ,laczδm15,△lacⅹ74, reca1 ,araδ139δ(ara-leu)7697, galu ,galk ,rps, (strr) enda1, nupg
6:hb101菌株
该菌株遗传性能稳定,使用方便,适用于各种基因重组实验
基因型:supe44,hsds20(rb-mb-),reca13,ara-14,proa2,lacy1, galk2,rpsl20,xyl-5,mtl-1,leub6,thi-1
7:jm110或scs110
大多数大肠杆菌菌株中含有dam甲基化酶和dcm甲基化酶,前者可以在gatc序列中腺嘌呤n-6位上引入甲基,后者在cca/tgc序列的第一个胞嘧啶c-5位置上引入甲基。常用的菌株都会产生dam,dcm,从而受到甲基化的影
响.
部分限制性内切酶对甲基化的dna不能切割,如fbai和mboi等,一般生物公司提供的内切酶说明中均有说明。
大多数酶切位点的甲基化不影响切割,而有些会影响,如xbai, bcli等。而且甲基化只发生在特定序列,以xbai为例,只有在位点序列旁出现ga或tc,该xbai位才会被甲基化。
而要解除这种限制修饰作用通常有两种方法:
(1)选用上述酶的同功酶,如sau3ai,dna识别切割位点与mboi相同;但不受甲基化影响;
(2)利用甲基化酶缺失的受体细胞进行dna的制备,如e.coli jm110和链霉菌等,前者dam和dcm甲基化酶已敲出,而后者细胞内本就没有甲基化酶,从这些细胞中抽提的dna就能被上述酶切割。
8:e.coli jm110
要排除dam,dcm甲基化的影响,需要用特定的dam-,dcm-的菌株,如jm110
如果由jm110或scs110等甲基化缺失的菌株产生的质粒,则不会被甲基化.各种感受态细胞的区别用途特征
xl1-blue菌株
基因型:enda1 gyra96(nalr) thi-1 reca1 rela1 lac glnv44 f‘[tn10 proab+ laciqδ(lacz)m15] hsdr17(rk- mk+)。
特点:具有卡那抗性、四环素抗性和氯霉素抗性。
用途:分子克隆和质粒提取。
bl21(de3)菌株
基因型:f–ompt gal dcm lon hsdsb(rb- mb-)λ(de3 [laci lacuv5-t7 gene 1 ind1 sam7 nin5])。
特点:该菌株用于以t7 rna聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。t7噬菌体rna聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体de3区的lacuv5启动子,该区整合于bl21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达。
bl21(de3)ply菌株
基因型:f- ompt gal dcm lon hsdsb(rb- mb-)λ(de3) plyss(cmr)。
特点:该菌株带有plyss,具有氯霉素抗性。此质粒还有表达t7溶菌酶的基因,t7溶菌酶能够降低目的基
因的背景表达水平,但不干扰iptg诱导的表达。适合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表达。
用途:蛋白质表达
dh5α菌株
基因型:f- enda1 glnv44 thi-1 reca1 rela1 gyra96 deor nupgφ80dlaczδm15δ(laczya-argf)u169, hsdr17(rk-,λ–
特点:一种常用于质粒克隆的菌株。其φ80dlaczδm15基因的表达产物与puc载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补,可用于蓝白斑筛选。reca1和enda1的突变有利于克隆dna的稳定和高纯度质粒dna的提取。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
jm109菌株
基因型:enda1 glnv44 thi-1 rela1 gyra96 reca1 mcrb+δ(lac-proab) e14-
[f‘trad36 proab+ laciq laczδm15]hsdr17(rk-mk+)。
特点:部分抗性缺陷,适合重复基因表达,可用于m13克隆序列测定和蓝白斑筛选。
用途:分子克隆、质粒提取和蛋白质表达。
dh10β菌株
基因型:
f- mcra δ(mrr-hsdrms-mcrbc) φ80dlaczδm15 δlacx74 enda1 reca1 deor
δ(ara,leu)7697 arad139 galu galk nupg rpsl λ-
the most widely used e. coli strain for bac cloning is dh10β。
host for puc and other α-complementation vectors; pbr322
useful for generating genomic libraries containing methylated cytosine or adenine residues,useful for plasmid rescue procedures。
electromax dh10β t1 cells
说明:
dh10β细胞是高转化效率的e. coli,可以完美应用于大多数实验应用。
dh10β基因型具有以下特点:
laczδm15用于重组克隆的蓝/白斑筛选
消除了mcra、mcrbc、mrr和hsdrms限制系统,允许构建更多具有代表性的基因组文库(1,2) enda1突变,可以增加质粒产量和数量
高效率转化大小为150 kb的质粒,用于产生cdna或基因组文库
dh10β可以表达tona的基因型,tona能够提供对t1和t5噬菌体感染的抗性(dh10βt1r)。
dh10β的基因型:f·mcraδ(mrr-hsdrms-mcrbc)φ80laczδm15δlacx74 reca1 enda1 arad139δ(ara, leu)7697 galu galkλ ·rpsl (strr) nupg
dh10β t1r的基因型:f·mcraδ(mrr-hsdrms-mcrbc)φ80laczδm15δlacx74 reca1 enda1 arad139δ(ara, leu)7697 galu galkλ ·rpsl (strr) nupg tona