产品及特点
甲型肝炎病毒(hepatitis a virus，hav)会引起甲型肝炎，该病毒病毒主要通过粪、口途径传播，传染源多为病人。甲型肝炎的潜伏期为 15～45 天，易感群体多为儿童及青年，发病率随年龄增长而递减，感染后临床表现多从发热、疲乏和食欲不震开始，继而出现肝肿大、压痛、肝功能损害，部份患者可出现黄疸。该病毒的感染对人体健康有较大损害，因此快速灵敏诊断具有重要意义。为此本公司开发了本产品，可用于在科研领域快速定量检测甲型肝炎病毒。它具有下列特点：
1.一站式，用于不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2.根据甲型肝炎病毒的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3.灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4.使用一管式 rt-pcr 技术，rt 和pcr 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5.本产品足够 50 次 30μl 体系的 rt-pcr。
规格及成份
注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供甲型肝炎病
毒专一的 dna 片段作为阳性对照。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分
开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。
自备试剂
样品 rna
使用方法
一、样品 rna 的制备
1. 如果有 n 个样品，必须设置 n+2 个提取，多出的一个是 pc（样品制备阳性对照），一个是 nc（样品制备阴性对照）。可以用 10μl  甲型肝炎病毒 pcr 阳性
对照的 10000 倍稀释的（稀释后浓度为 1×10e4 拷贝/μl，10μl 相当于 1 万拷贝，可以将 10μl 原液加入到 990μl  自备te 溶液中，充分混匀，此为 100倍稀释液。再取 10μl 此稀释液加入到 990μl  自备 te 溶液中，充分混匀，此为 10000 倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品rna。
2. 用自选方法纯化 n+2 个样品的 rna，本试剂盒跟市场上大多数病毒 rna 提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送 20 次天净沙核酸释放剂试用装，其使用手册可以从本公司网站搜索天净沙核酸释放剂或产品编号 61202 下载。
二、设置 rt-pcr 反应（20μl 体系）
2. 如果有 n+2 个样品，则标记 n+4 个pcr 管（额外增加的两个管一个是 rt-pcr
阳性对照，另一个是 rt-pcr 阴性对照）并按照下表在 pcr 管中加入下列成分：
成份
n+2 个
样品管
rt-pcr
阴性对照
rt-pcr
阳性对照
5×双酶一管式 rt-pcr buffer
各 4 μl
4 μl
4 μl
甲型肝炎病毒 rt-pcr 引物混合液
各 2 μl
2 μl
2 μl
n+2 个制备的样品
各 12.5 μl
不加
不加
甲型肝炎病毒 rt-pcr 阳性对照
10000 倍稀释液
不加
不加
12.5 μl
mmlv-taq mix
1.5 μl
1.5 μl
1.5 μl
4.上机进行 rt-pcr，rt-pcr 反应参数为:
过程
温度
时间
逆转录
42℃
60 分钟
预变性
95℃
5 分钟
pcr 反应
（35 个循环）
95℃
30 秒
55℃
30 秒
72℃
30 秒
延伸
72℃
5 分钟
5.琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 192bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。
关联产品 甲型肝炎病毒可视化 rt-lamp 检测试剂盒
本产品只能用于科研，不能用于临床。

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上海雅吉生物科技有限公司